Diagnostic performance analysis of two-gene methylation in Urothelial carcinoma based on small volume urine sample. (Cancer, 2026, 132(7):e70373. SCI影响因子5.1, 中科院1区)
本研究由中山大学肿瘤防治中心为第一完成单位。
临床问题：目前临床在用的诊断方法包括膀胱镜检查与尿脱落细胞学检查：膀胱镜虽为金标准，但其有创性、高成本及对操作者的依赖性，限制了其在高危人群筛查与治疗后随访中的应用。尿脱落细胞学为无创检查，对高级别肿瘤具有中等特异性，但对低级别非肌层浸润性膀胱癌（low‑grade NMIBC）的灵敏度极低，易造成漏诊，进而影响早期干预与长期预后 。上尿路尿路上皮癌的诊断尤为困难：尿细胞学阳性率低，而输尿管镜操作较膀胱镜更复杂、可及性更差，因此临床亟需更简便的检测手段。
研究思路：本研究旨在评估靶向TWIST1 与 H4C6 基因的甲基化检测试剂盒对尿路上皮癌的诊断效能及临床应用价值。通过对上述双基因尿液甲基化标志物的探索，建立一种可靠、无创且灵敏度更高的早期检测方法（图1）。
图1：研究流程图
本研究为一项设盲队列的前瞻性临床验证研究，通过743 例拟行经尿道膀胱肿瘤电切术（TURBT）的患者队列（387例膀胱癌（UCa）患者/356例非膀胱癌对照者），留取术前晨尿中段尿标本，取 3.5 mL 尿液提取核酸并进行亚硫酸氢盐转化后，进行对TWIST1、H4C6、ACTB基因的甲基化qPCR检测。其关键性能指标表现优异：灵敏度 93.02%、特异度 92.13%、阳性预测值 92.78%、阴性预测值 92.39%（图2）；且在不同肿瘤分期与分级中均保持可接受的灵敏度：Ta 期为 82.34%，低级别病变为 76.32%，性能优于尿脱落细胞学及多数已报道的甲基化检测方法。
图2：受试者工作特征曲线
甲基化水平与肿瘤特征的相关性：对比分析了H4C6和TWIST1基因的甲基化率及相对甲基化水平（定义为ΔCT = log10 [2^(CtACTB-CtH4C6/Twist1) × 10000]）（图3）。结果显示，非膀胱癌组与膀胱癌组之间存在显著差异；尽管不同亚组（低恶性潜能/低级别 vs 高级别；非肌层浸润性膀胱癌 vs 肌层浸润性膀胱癌）之间也存在差异，但仅H4C6基因在低恶性潜能/低级别组与高级别组之间的差异具有统计学意义，其余差异无统计学意义。
图3：H4C6和TWIST1基因的甲基化率及相对甲基化水平分析
结论：H4C6/TWIST1 双基因甲基化检测对尿路上皮癌具有优异的诊断效能，在各类临床场景中灵敏度达93.02%、特异度达92.13%。该检测对高级别肿瘤（灵敏度97.64%）和肌层浸润性病变（灵敏度97.50%）的诊断表现尤为突出，同时对早期病变和低级别病变仍保持较高的检出率。
作为一种无创尿液检测方法，其性能优于传统检测方法——尤其在低级别肿瘤诊断中优势显著——且检测结果不受患者性别、年龄等特征影响，一致性良好。这些研究结果表明，H4C6/TWIST1甲基化检测有望成为尿路上皮癌初始诊断与监测的关键工具，但其临床应用价值仍需通过更大规模的验证研究进一步证实。
局限性：上尿路尿路上皮癌病例数相对偏少，需开展针对性大样本研究验证该亚组效能；未系统评估纵向预后与复发预测价值，未来需纳入长期随访，明确本检测在预后评估与监测中的作用。
客服1
客服2